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抗生素在細(xì)胞培養(yǎng)中的使用可以最大限度地降低污染,從而降低細(xì)胞、試劑的費(fèi)用損失和時(shí)間損失。因此,細(xì)胞培養(yǎng)常用抗生素有哪些呢?一、嘌呤霉素鹽酸鹽Puromycin,Dihydrochloride嘌呤霉素(Puromycin)是一種氨基糖苷類抗生素,能有效抑制革蘭氏陽性菌生長,還能抑制原生生物、藻類、哺乳動物和昆蟲細(xì)胞的生長,一般2天內(nèi)能殺死99%的細(xì)胞。二、鹽酸萬古霉素VancomycinHydrochloride鹽酸萬古霉素(Vancomycinhydrochloride)是一...
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DNA連接酶(DNAligases)是一類重要的酶,在DNA復(fù)制、修復(fù)和重組過程中發(fā)揮關(guān)鍵作用。一、ATP依賴性連接在真核生物的連接酶如DNA連接酶I中,連接反應(yīng)是ATP依賴性的。ATP的水解驅(qū)動了DNA鏈的連接。連接反應(yīng)主要發(fā)生在DNA雙鏈斷裂的末端。T4DNA連接酶是典型的ATP依賴性連接:(1)原理與特點(diǎn):T4DNA連接酶是一種來自噬菌體T4的連接酶,其主要原理是在DNA鏈斷裂的末端引入磷酸二酯鍵,將兩個(gè)DNA片段連接起來。它需要ATP作為輔助能量。(2)優(yōu)點(diǎn):T4DN...
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DNA連接酶(DNAligases)是一類重要的酶,在DNA復(fù)制、修復(fù)和重組過程中發(fā)揮關(guān)鍵作用。它們的主要功能是連接DNA鏈上的磷酸二酯鍵,形成完整的DNA雙鏈。這一過程對于維持基因組的完整性和穩(wěn)定性至關(guān)重要。DNA連接酶的基本作用原理是通過催化DNA鏈的連接,以形成連續(xù)的磷酸二酯骨架。連接過程通常包括以下三個(gè)步驟:(1)底物識別DNA連接酶識別DNA分子中需要連接的兩個(gè)斷裂部位(通常是5'末端和3'末端)。(2)磷酸基團(tuán)的激活在連接前,DNA連接酶通常需要結(jié)合ATP(腺苷三...
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在醫(yī)學(xué)臨床、生物學(xué)研究上,用于測定各種各樣的抗原、半抗原和抗體,Elisa法為雜交瘤細(xì)胞株的篩選提供了簡便、靈敏、快速的測定方法。那讓我們一起來看看抗體抗原測定的Elisa方法吧!抗體抗原測定的Elisa方法一:直接法1、將抗原吸附在固相載體表面;2、添加一種封閉試劑,防止檢測抗體出現(xiàn)非特異性結(jié)合;3、添加直接偶聯(lián)某種酶(如HRP)的檢測抗體。該檢測抗體將結(jié)合抗原,并且剩余的抗體會從孔中洗掉;4、添加這種酶的底物;5、短暫孵育后,在酶標(biāo)儀上測定每個(gè)孔的信號??贵w抗原測定的El...
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Elisa是一種快速、靈敏、準(zhǔn)確可靠的定性定量分析方法。樣本的處理對于Elisa實(shí)驗(yàn)的成功起著關(guān)鍵的作用。組織樣本一般制成組織勻漿,處理方法如下:(1)使用干凈的工具解剖目標(biāo)組織,盡快置于冰上,以防被蛋白酶降解。(暫時(shí)不處理的組織,置于圓底微量離心管中,浸入液氮中“速凍”,在-80℃下存儲樣品備用)。(2)用預(yù)冷的PBS緩沖液(0.01M,pH=7.4)洗滌組織去除殘留的血液,稱重后備用。若組織塊較大,需先剪碎。(3)在冰上用研磨緩沖液(常用PBS緩沖液,但最好使用50mMT...
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